轉(zhuǎn)染試劑那些事兒

轉(zhuǎn)染技術(shù)新寵-陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù)

適用宿主廣泛，操作簡便，細(xì)胞毒性小，轉(zhuǎn)染率高。其中聚乙烯亞胺（PEI）的轉(zhuǎn)染性能比較好。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔兩個(gè)碳原子，就是第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何PH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體。這種聚陽離子能將各種報(bào)告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，而且細(xì)胞毒性低。大量實(shí)驗(yàn)證明，PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設(shè)計(jì)更復(fù)雜的基因載體時(shí)，PEI經(jīng)常做為核心組成成分。

線性聚乙烯亞胺（Line PEI）轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性低，有利于細(xì)胞定位，而且轉(zhuǎn)染率*。

Polyscience公司的兩款明星產(chǎn)品線性聚乙烯亞胺（23966-1和24765-1）近年來越來越多的受到研究者們的青睞。其產(chǎn)品被運(yùn)用到大量的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，也出現(xiàn)在大量的文獻(xiàn)中。

Polyscience公司成立于1961年，總部位于賓夕法尼亞州沃靈頓，是一家生產(chǎn)研發(fā)化學(xué)產(chǎn)品的公司。該公司的產(chǎn)品種類已經(jīng)累計(jì)超過3000種，其產(chǎn)品的特點(diǎn)是體積小，附加值高。

公司產(chǎn)品主要包含：

1. 單體和聚合物
2. 微球和粒子（有機(jī)、無機(jī)、可生物降解、磁珠、熒光素、染料、特異性抗體和蛋白包被顆粒，直徑從40nm到10mm）用于核酸提取、蛋白分離和純化等。
3. 高性能粘合劑、涂料和密封劑

23966-1

Polyethylenimine, Linear,MW 25000,Transfection Grade (PEI 25K)



化學(xué)性質(zhì)：

CASNO.	9002-98-6,26913-06-4
分子式	(CH2CH2NH)n
分子量	25,000
熔點(diǎn)	73-75º
溶解度	SolubleIn: hotwater,coldwateratlowpH,methanol,andethanol. InsolubleIn: benzene,ethyletherandacetone
Appearance	Whitetoyellowsolid

24765-1（更高效的PEI聚乙烯亞胺聚合物轉(zhuǎn)染試劑）

PEI MAX-Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW40,000)



基本描述：

PolyethylenimineHClMAX,Linear,Mw40,000（PEI40,000）是熱賣產(chǎn)品線性化聚乙烯亞胺PEI25,000的升級產(chǎn)品，不同之處在于1）*水解（去乙酰化）；2）PEI25，000的鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；3）含更長連續(xù)性乙烯亞胺（ethyleneimine）片段，其質(zhì)子化氮水平比PEI25，000提高11%以上。本品經(jīng)堿中和后，可轉(zhuǎn)化為線性化自由胺（PEI），此時(shí)分子量正相當(dāng)于25,000。

ThomasM，etal（2005）研究數(shù)據(jù)表明，去乙酰化的PEI40,000（PolyethylenimineMAX40,000）體外質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率提高21倍，小鼠體內(nèi)靶向效率達(dá)到10,000倍，隨之肺部特異療效顯示增強(qiáng)1500倍。

化學(xué)性質(zhì)：

CASNO.	9002-98-6,26913-06-4
MolecularWeight	40,000（~22,000freebase）
Solubility	SolubleIn: Coldandroomtemperaturewater  InsolubleIn: Commonorganicsolvents(ethanol,acetone,tetrahydrofuran)
Appearance	Whitetooff-whitefreeflowingsolid

 

使用方法（僅供參考）

1. Pour ~450 mL of Milli-Q H2O into a 500-mL glass beaker.

2. Add 500 mg of PEI to the beaker with stirring.

3. Add concentrated HCl drop-wise to the solution to pH <2.0.

4. Stir until the PEI is dissolved (~2-3 h). Maintain the pH <2.0 throughout.

Approximately 800 μL of 12 M HCl will be required for full PEI dissolution. There may still be some small fiber particles that will not dissolve.

5. Add concentrated NaOH drop-wise to the solution to pH 7.0.

Approximately 500 μL of 10 M NaOH will be required to neutralize the PEI solution.

6. Pour the solution into a 500-mL glass cylinder. Adjust the final volume to 500 mL with Milli-Q H2O.

7. Filter-sterilize the solution through a 0.22-μm membrane.

8. Store aliquots of the desired volume at -20°C.